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UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)測乙酰色氨
更新時(shí)間:2016-03-31 點(diǎn)擊次數(shù):2517

UV1901PC紫外可見分光光度計(jì)測乙酰色氨測定法

本法系用紫外-可見分光光度法(吸收系數(shù)法)測定

人血白蛋白供試品中的乙酰-DL-色氨酸含量。

測定法用生理氯化鈉溶液將供試品蛋白質(zhì)稀釋至

5 % ,即為供試品溶液。量取供試品溶液0.1ml,分別加

人生理氯化鈉溶液0. 3ml0. 3mol/L高氯酸溶液3. 6ml,

混勻;另取生理氯化鈉溶液0.4ml,加0. 3mol/L高氯酸

溶液3. 6 m l ,混勻,作為空白對(duì)照。室溫放置1 0分鐘,

以每分鐘3500轉(zhuǎn)離心2 0分鐘,取上清液在波長28 0 n m

測定吸光度,用空白溶液調(diào)零點(diǎn)。按下式計(jì)算供試品中的

乙酰-DL-色氨酸含量:

供試品/V-乙酰-DL-色氨酸含量_ (A2SQ Xn) /5. 25

(mmol/g) P

式中〃為供試品的稀釋系數(shù);

5. 2 5N -乙酰-DL-色氨酸的毫摩爾吸收系數(shù);

P 為供試品的蛋白質(zhì)含量,g/L

3 1 1 3 苯酚測定法

本法系依據(jù)溴酸鹽溶液與鹽酸反應(yīng)產(chǎn)生溴,遇苯酚生

成三溴苯酚,過量的溴與碘化鉀反應(yīng)釋出碘,析出的碘用

硫代硫酸鈉滴定液滴定,根據(jù)硫代硫酸鈉滴定液的消耗

量,可計(jì)算出供試品中苯酚的4 量。

測定法精密量取供試品lml,置具塞錐形瓶中,加

50ml,精密加人0. 02mol/L溴溶液(稱取溴酸鉀

0.56g,加溴化鉀3g,加水溶解并稀釋至1000ml) 15?

25ml (供試品含苯酚量0_ 3 % ?0 . 5 %時(shí)加25ml,小于

0.3%則加15ml),沿瓶壁加人6mol/L鹽酸溶液10ml,搖

勻,密塞,在暗處放置30分鐘后,加2 5 %碘化鉀溶液2ml

于具塞錐形瓶頸口,稍啟瓶塞,使流下,密塞,搖勻。以

少量水洗瓶頸,用硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L) 滴定至

近終點(diǎn)時(shí),加淀粉指示液約0.5ml,滴定至藍(lán)色消失,并

將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。

按下式計(jì)算:

苯酚含量(%) - (V°~Vl) XcX15. 69X100

式中V。為空白試驗(yàn)消耗硫代硫酸鈉滴定液的體積,ml;

V i 為供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液的體積,ml;

c為硫代硫酸鈉滴定液的濃度,mol/L;

15. 6 9為苯酚分子量的1/6。

【附注】(1 )硫代硫酸鈉滴定液(0. lmol/L) 的制備

及標(biāo)定稱取硫代硫酸鈉26g與無水碳酸鈉0. 20g,加新

沸過的冷水適量溶解并稀釋至1000ml,搖勻,放置1 個(gè)

月后濾過。取在__________120°C干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀0. 15g,

精密稱定,置碘瓶中,加水50ml溶解,加碘化鉀2.0g,

輕輕振搖使溶解,加稀硫酸(5.7— 100) 4 0 m l ,搖勻,密

塞;在暗處放置1 0分鐘后,加水250ml稀釋,用本液滴

定至近終點(diǎn)時(shí),加淀粉指示液(稱取可溶性淀粉0.5g,

加水5ml混懸后緩緩傾人100ml沸水中,隨加隨攪拌,繼

續(xù)煮沸2 分鐘,冷卻,傾取上層清液。本液應(yīng)臨用配制)

3 m l ,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失而顯亮綠色,并將滴定的結(jié)果

用空白試驗(yàn)校正。每l ml硫代硫酸鈉滴定液(0. lmol/L)

相當(dāng)于4.903mg重鉻酸鉀。根據(jù)本液的消耗量與重鉻酸

鉀的取用量,算出本液的濃度,即得。

( 2 )硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L) 的制備精密

量取硫代硫酸鈉滴定液(0. lmol/L) 100ml, 加水準(zhǔn)確稀

釋至500ml,搖勻。

( 3 )可做限度測定。

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