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紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)己二酰肼含量測(cè)定法
更新時(shí)間:2016-04-11 點(diǎn)擊次數(shù):3776

 

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)己二酰肼含量測(cè)定法

本法系依據(jù)在四硼酸鈉存在的條件下,己二酰肼

( A D H ) 中的氨基基團(tuán)能與三硝基苯磺酸(T N B S ) 發(fā)生

顯色反應(yīng),采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定b 型流感嗜血

桿菌多糖衍生物中己二酰胼的含量。

試劑 1 ) 己二酰肼對(duì)照品貯備液(lmg/ml)

密稱(chēng)定己二酰肼0. I00g,加水定容至100ml,于一20DC

保存。

( 2 )己二酰肼對(duì)照品工作液(20Mg/ml) 精密量取

A D H 對(duì)照品貯備液0.2ml,加水定容至10ml

(3) 5 % 四硼酸鈉溶液稱(chēng)取四硼酸鈉(Na2B40 7

10H2O) 47.35g,加水定容至500ml,于室溫保存。

(4) 3 % T N B S溶液量取T N B S 5ml, 加水定容至

50ml,于一20°C保存。

測(cè)定法量取5 % 四硼酸鈉溶液1.0ml,加水lml

混勻,再加人3 % T N B S 溶液0.3ml,混勻,于享溫放置

15分鐘,在波長(zhǎng)500mn處測(cè)定吸光度,作為空白對(duì)照。

先將供試品用水稀釋至己二酰肼濃度不高于2CVg/ml,

作為供試品溶液,然后取1.0ml,加人5% 四硼酸鈉溶

1.0ml,自加人3 % T N B S 溶液0.3ml” 起同法

操作。

分別取己二酰胼對(duì)照品工作液0. 2ml、0. 4ml

0.6ml、0.8ml、1.0ml于試管中,每管依次加水0.8ml、

0.6ml、0.4ml、0.2ml、O m l ,加人5% 四硼酸鈉溶液

1. 0 m l ,加入3 % T N B S溶液0.3ml起同法操作。

結(jié)果計(jì)算以己二酰肼對(duì)照品工作液的濃度對(duì)其相應(yīng)

的吸光度作直線(xiàn)回歸,求得直線(xiàn)回歸方程,將供試品溶液

的吸光度代人直線(xiàn)回歸方程,求出供試品溶液的己二酰肼

含量,根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算供試品的己二酰肼含量。

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